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    人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒

    更新時間:2023-11-14

    簡要描述:

    人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒本試劑盒用于測定樣本表皮生長因子(EGF)含量。

    型號:HB063-Hu點擊量:192

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    人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒

    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人表皮生長因子(EGF)水 平。用純化的人表皮生長因子(EGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體, 往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長因子(EGF),再與 HRP 標記的 表皮生長因子(EGF)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經 過che底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色, 并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生 長因子(EGF)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人表皮生長因子(EGF)濃度。

    標本要求
    1.標本處理:(1)水樣 采集后經 -20℃反復凍融三次,再經玻璃纖維過濾后,備查
    (2)組織 樣品用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)抽提,或按相
    關文獻提取進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,
    可將標本放于-20℃保存,備查
    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


    人表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒操作步驟
    1. 加樣:分別設標準孔、空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、
    待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
    然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    2. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復 5 次,拍干。
    6. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    15 分鐘.
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    7. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    8. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
    液后 15 分鐘以內進行。


    計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
    OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
    即為樣品的實際濃度。


    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
    控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值
    大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
    算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。


    規格:
    96 份/盒


    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個月






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