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    小鼠I型膠原C端肽(CTX-1)ELISA試劑盒

    更新時間:2022-08-30

    簡要描述:

    【產品名稱】:中文名稱:小鼠I型膠原C端肽(CTX-1)ELISA試劑
    【包裝規格】:96T/盒
    【預期用途】:僅供科研使用,本試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中小鼠I型膠原C端肽(CTX-1)的表達。

    型號:點擊量:913

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    1.樣本類型和采集:

    血清將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置0.5-2小時或4過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20-80保存,但應避免反復凍融。
     血漿EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20-80保存,但應避免反復凍融。

    組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mLPBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    細胞裂解液: 吸棄培養液,用PBS(0.01 M,pH 7.4)將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞,加入2-5 mL PBS(0.01 M,pH 7.4)。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液,4℃ 1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融3次,使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min,除去細胞碎片,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    細胞培養物上清或其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    2.樣本保存和穩定性

    樣本在2-8條件下,可以儲存72h,在- 20℃-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融。

    步驟:

    1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同。

    2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

    4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

    7. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    8. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10-20分鐘。

    10.終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11.測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    注意:

    1. 試劑準備:試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準備一次實驗所需要的酶標條,其它的可從微孔板上拆下,密封,按照說明書要求保存,以備下次使用。

    2. 加樣:實驗操作中請使用一次性的滅菌吸頭,避免污染。加樣時注意不要有氣泡產生,將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。與反應試劑加入一樣,加樣過程中第一個孔與最后一個孔加樣時間間隔盡量?。ㄒ话憧刂圃?/span>10 分鐘以內),如果太大,將會導致不同的“預溫育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。為了測值的準確性,推薦設置復孔進行實驗。

    3. 溫育:為防止樣品蒸發,實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內,以避免液體蒸發,洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態,同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

    4. 洗滌:濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。充分洗滌非常重要,在每次洗滌過程中,都要將洗滌液*甩干。洗滌過程中反應孔內殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干,勿將吸水紙直接放入反應孔中吸水,同時要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印,避免影響最后的酶標儀讀數。如果使用自動洗板機,請在熟練使用后再用于正式實驗過程中。

    5. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化,如觀察到顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強而影響酶標儀光密度讀數。

    6. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。


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