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    上海恒遠重點分析如何選擇一抗二抗

    更新時間:2018-03-07   點擊次數:1280次

        根據我公司技術員的總結了解,不少客戶對一抗、二抗的選擇方面甚是苦惱,您是否也正面對此問題而不知怎樣做呢?在今天的內容里,上海恒遠重點分析。

            

        通常情況下,某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到該實驗的二抗,需要綜合以下幾個方面進行考慮:
        *、一抗的物種來源
        一抗是在什么物種來源的,相應的二抗也要是抗該物種的抗體。例如,如果一抗是在小鼠體內制備的,那么你就應當選擇抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔體內制備的,那么二抗就應當是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質量并無明顯的影響。

    第二、一抗是屬于哪個類或亞類
        二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗IgG抗體.

        單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗體。

        如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。

        如果您不知道一抗是哪一類別或亞類,那么抗小鼠IgG是一個不錯的選擇,因為此種抗體可以識別大多數類型的IgG免疫球蛋白。

    下面總結了幾種具有不同特異性的二抗:
        針對整個抗體分子(H+L)具有特異性:如anti-IgG(H+L),此類抗體既可以與抗體的重鏈結合也可以與輕鏈結合,即與抗體分子的 Fc,F(ab’)2/Fab部分均可反應,anti-IgG(H+L)也可以與其他免疫球蛋白家族反應,因為所有的免疫球蛋白都具有相同的輕鏈。

        針對Fab片段具有特異性:這類抗體與重鏈輕鏈均可以結合,由于它們可以與輕鏈反應,它們同時也已和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應。

        這對Fc片段或重鏈具有特異性:這類抗體和重鏈的Fc部分反應,一次它們是類別特異性的(即gamma鏈特異性抗體只與IgG反應,mu鏈特異性抗體只識別IgM,依此類推)。

        輕鏈特異性:與所有類別的抗體反應,因為所有類別的抗體均具有相同的lambda鏈或kappa鏈。

        經過吸附處理的二抗:不同來源的免疫球蛋白含有相似的結構,抗一個物種的抗體可能與其他物種發生交叉反應,一次有些二抗經過了動物或人類IgG吸附處理,以減少非特異性背景。例如,如果是小鼠的組織或細胞,那么選擇經小鼠血清或IgG吸附處理過的二抗可以減少非特異性結合。但是此種抗體識別表位的數量被大大減少。

             
        第三、選擇哪種形式的二抗,是整個IgG分子,F(ab’)2片段,還是Fab片段?整個IgG分子:此種抗體適用于多數情況。
        F(ab’)2片段:該種抗體是由兩個靠二硫鍵連接的用于結合抗原的Fab片段組成,這些抗體用在特定的情況中,如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結合的情況。

        Fab片段:它們只有一個結合位點,一般用來封閉內源性免疫球蛋白。
    第四、選用耦聯有哪種探針的二抗?
        一般來講,耦聯到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于western blot和ELISA,zui常用的二抗是酶標二抗,而細胞或組織標記實驗(細胞免疫化學,組織免疫化學,流式細胞術)中通常使用熒光基團標記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號,可以使用biotin/avidin檢測系統。

    第五、抗體的純度:
        親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎,因為這些產品的純度zui高,產生的非特異性背景zui少。但是有些情況下也要考慮到純化過程中損失的IgG部分,因為其中含有親和力很高的抗體,尤其是當目的抗原存在的量很小的時候,高親和性的IgG部分就顯得尤為重要。




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